檸檬酸合酶（CS）測(cè)試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章
檸檬酸合酶（Citrate Synthase，CS）試劑盒
商品貨號(hào)：QS1005
英文名稱：Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名：檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS）試劑盒 檸檬酸合酶(CS）測(cè)試盒,生化法試劑盒
檢測(cè)方法：常量法
| 商品貨號(hào)： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| QS1005-25管/24樣 | 25管/24樣 | ￥2000.00元 | ||
| QS1005-50管/48樣 | 50管/48樣 | ￥3200.00元 |
測(cè)定意義：
CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶，是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
測(cè)定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A，進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸；該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。
貨號(hào): QS1005-50 規(guī)格：50管/48樣
檸檬酸合酶（citrate synthase，CS）試劑盒說明書
分光光度法
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
CS（EC 2.3.3.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中，是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶，是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。
測(cè)定原理：
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A，進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸；該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB，在 412nm處有特征吸光值。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體10mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1mL×1 支，-20℃保存；
試劑四：液體50mL×1 瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×2 支，4℃保存，臨用前加入800μL 無水乙醇，用不完的試劑4℃保存一周；
試劑六：粉劑×4 支，-20℃保存，臨用前加入400μL 蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑七：粉劑×2 支，-20℃保存，臨用前加入800μL 蒸餾水，用不完的試劑仍-20℃保存；
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
- 稱取約0.1g 組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL 試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 將勻漿600g，4℃離心5min。
- 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
- 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS（此步可選做）。
- 在步驟（4）中的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3 秒，間隔10 秒，重復(fù)30 次），用于線粒體CS 測(cè)定。
- 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，蒸餾水調(diào)零。
- 將試劑四、五、六和七在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）孵育5min。
- 樣本測(cè)定
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 |
試劑四 | 780 |
試劑五 | 30 |
試劑六 | 30 |
樣本 | 30 |
試劑七 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL 玻璃比色皿中，加試劑七的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在412nm 波長(zhǎng)下記錄20 秒時(shí)的初始吸光度A1 和反應(yīng)2min 后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
CS 活性計(jì)算：
- 按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
- 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T=222.2×ΔA÷W
- 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。
CS（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=0.4444×ΔA
V 反總：反應(yīng)體系總體積，9×10-4 L；ε：TNB 摩爾消光系數(shù)，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬(wàn)。
| 輔酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
| MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
| QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
| MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
| QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS）測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
| QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS）測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
| MS1005 | 檸檬酸合酶(CS）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
| QS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
| MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）測(cè)試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
| QS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
| MS1011 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |